老哥俱乐部

细胞简介：

细胞特性
：

推荐培养基：

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

细胞简介：

肠指的是从胃幽门至的消化管。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段
。

肠壁结构一般分4层
，由外向内依次为：浆膜层，平滑肌层
，粘膜下层和粘膜层。粘膜层又分为3层：靠近粘膜下层的是一层平滑肌，称为粘膜肌层。其次为结缔组织
，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜。小肠粘膜有纵行和横行皱襞，并有无数细小的指状突起，称为绒毛。绒毛的基底处粘膜内陷成管状，称为利贝屈恩氏隐窝
。

隐窝基底部的上皮细胞不断地进行有丝分裂
，产生新细胞。隐窝上皮中还有许多杯状细胞，它分泌粘液，起滑润食物和保护粘膜的作用。大肠内无绒毛
，其大部分上皮细胞分泌粘液
。直肠的上皮细胞也分泌粘液。

细胞特性

：

1）来源：肠道组织

2）含量：>5x105 个/mL

3）鉴定：角蛋白(PCK)荧光染色法

4）纯度
：>85%

5）污染：支原体、
、酵母和检测为阴性

6）规格
：1mL冻存管包装

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠酪胺酸酶(TYR)检测试剂盒 
，英文名： TYR ELISA Kit

Mouse free fatty acids (FFA) ELISA Kit 小鼠游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒

Ratai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 大鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforF-TESTO(HumanFreeTestoterone)ELISAKit人游离睾同

细胞过氧化物酶(peroxidase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Ratprogesteronereceptor,PGRELISAKit大鼠孕同受体(PGR)检测试剂盒

TWSG1重组小鼠 TWSG1 蛋白 (His 标签) Protein

成纤维细胞生长因子5(FGF5)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 5 (FGF5)

JAM3重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白 Protein

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated

CD83 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD83 蛋白 (His 标签)

成纤维细胞生长因子5(FGF5)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 5 (FGF5)

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated

TWSG1重组小鼠 TWSG1 蛋白 (His 标签) Protein

CD83 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD83 蛋白 (His 标签)

JAM3重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白 Protein

小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA 试剂盒

Human serine protease (PRSS) ELISA Kit 人丝蛋白酶(PRSS)检测试剂盒

HumanAbnormalprothrombin,APTELISAKit 人异常原(APT)检测试剂盒 进口分装

Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1检测试剂盒人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)检测试剂盒

植物叶片叶绿体粗提分离试剂盒20次

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase3，TIMP-3ELISAKit人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)检测试剂盒

小鼠肠粘膜上皮细胞酰基转移酶（AAT）测试盒   可见分光光度法   50管/48样

脂蛋白酯酶（LPL）＆肝脂酶（HL）测试盒   可见分光光度法   50管/48样

甘油三酯（TG）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样

血清总（TC）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样