老哥俱乐部

细胞简介：

自然杀伤细胞 (natural killer cell，NK)是机体重要的细胞，不仅与抗肿瘤
、 抗病毒感染和调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身性的发生
。一种稳定表达在NK和LAK细胞表面的LAK-1分子
，120kDa，NK细胞在IL-2条件下培养20天LAK-1仍为阳性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失
。LAK的杀伤活性可被抗LAK-1 McAb所抑制
。

自然杀伤细胞刺激因子（ natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 对NK细胞有刺激作用。IL-2
、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(leukoregulin,LR) 对NK细胞的活化和分化有正调节作用
， 体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK的杀伤活性
。前列腺素 (PG)E1
、E2
、D2和肾上腺皮质等对NK细胞的活性有抑制作用
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物小鼠的正常外周血组织。

2)细胞鉴定
：CD56或CD16荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体

、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：圆形或椭圆形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代NK细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

IL-29ELISAKit

鱼磷酸烯醇丙酮酸羧激酶,细胞质基质[GTP](PCK1)elisa分析检测试剂盒

cytosolic[GTP](PCK1)ELISA kit

人补体片断5b(C5b)elisa分析检测试剂盒

C5bELISAKit

酶耦联比色法定量检测试剂盒

人雌酮(estrone,E1)elisa检测试剂盒

大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)elisa检测试剂盒

小鼠肿廇蛋白P63(TP63)elisa检测试剂盒

核蛋白相互作用蛋白1抗体

KPNA1

BATF2蛋白抗体

BATF2

分选连接蛋白2抗体  Anti-SNX2

活性氧簇ROS抗体  Anti-ROS/c ros

细胞分裂周期相关蛋白1抗体  Anti-CDCA1/Nuf2

ZCWCC1抗体  Anti-ZCWCC1

SCAPER蛋白抗体

SCAPER

环核苷酸门控阳离子通道蛋白β3/CNG-β3抗体

CNGB3

SAMD14抗体  Anti-SAMD14

小鼠抗p21激活激酶4抗体  Anti-PAK4

突触富含脯膜蛋白7抗体  Anti-PRR7

组织型纤溶酶原激活剂抗体  Anti-TPA/PLAT

山羊抗鸡IgY抗体

大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)elisa生化检测试剂盒

DAT ELISA Kit

山羊促肾上腺皮质释放因子(CRF)elisa生化检测试剂盒

小鼠NK细胞CRFELISAKit

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。