老哥俱乐部

细胞简介
：

肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化
、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用。肝脏是尿素合成的主要器官
，又是新陈代谢的重要器官

。

肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们分解或以原形排出体外。在肝中及外围有部分结缔组织，这些结缔组织是由成纤维细胞组成
。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物小鼠的正常肝脏组织。

2)细胞鉴定
：Vimentin荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体、
、酵母和
。

5)细胞生长方式：长梭状，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代成纤维细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠糖原合成酶激酶(GSK)elisa检测试剂盒

大鼠半乳凝素8(GAL8)elisa检测试剂盒

小鼠羧肽酶A3(CPA3)elisa检测试剂盒

人T细胞白血病病毒Ⅰ/II(HTLV-Ⅰ/II)抗体elisa分析检测试剂盒

钙调蛋白结合检测试剂盒筛选

组织血管紧张素Ⅰ转化酶（ACE）总活性荧光定量检测试剂盒

人二胺氧化酶(DAO)elisa分析检测试剂盒

大鼠肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)elisa检测试剂盒

鱼促甲状腺素(TSH)elisa检测试剂盒

溶质载体家族17成员3抗体 SLC17A3

乳腺癌易感基因1相互作用蛋白1抗体 MRPL36

KLHL1蛋白抗体 KLHL1

MAN1C1蛋白抗体 MAN1C1

中介素抗体 ADM2

肿瘤异常甲基化蛋白2抗体 HIC2

干扰素α11抗体 Interferon alpha 11

构成激活过氧化酶活化受体γ样蛋白2抗体 FAM120C

纤维蛋白原γ链抗体 Fibrinogen gamma chain

线粒体内膜转位酶8A/耳聋/肌张力障碍肽抗体 TIMM8A

γ氨基丁酸转氨酶抗体 ABAT

白介素-17E抗体 IL17E

BOLA2蛋白抗体 BOLA2

CD361抗体 CD361

离子通道蛋白Kv3.1抗体 KCNC1

磷酸化蛋白激酶样内质网激酶抗体 Phospho-PERK (Thr980)

胱抑制剂（Cystatin C）定量检测试剂盒

共济失调蛋白8抗体  Anti-Twinkle/ATXN8

大鼠钙卫蛋白(CALP)elisa分析检测试剂盒

CALP ELISA kit

小鼠肝成纤维细胞豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)elisa分析检测试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。