老哥俱乐部

细胞简介：

膈肌是位于胸腔与腹腔之间的肌肉纤维组织，其周围为肌腹，中央为腱膜
，是机体重要的呼吸肌。

组织学上
，膈肌属骨骼肌
，成熟的骨骼肌纤维不具有增殖能力。骨骼肌卫星细胞是骨骼肌与肌膜之间的一种体积较小的细胞
，排列在肌纤维的表面

，当肌纤维损伤后，可分化为肌纤维修复损伤。随着组织发育的成熟
，肌卫星细胞数量相对减少。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物正常膈肌组织。

2）细胞鉴定
：肌动蛋白（α-actin）荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%

。

4）不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5）细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代骨骼肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠肌红蛋白(MYO)检测试剂盒 ，英文名： MYO ELISA Kit

Rat 1,3- beta D Pouguese glucosidase (1,3- beta D glucosidase) ELISA Kit 大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)检测试剂盒

RatCathepsinK,cath-KELISAKit 大鼠组织蛋白酶K(cath-K)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforET3游离三甲状腺原T3

细胞赖羟化酶(lysylhydroxylase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Ratmaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAKit大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)检测试剂盒

HEPACAM2重组大鼠 HepaCAM2 蛋白 (His 标签) Protein

GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2 0.5mgGABABR2/GB2(GABA B Receptor 2) γ1氨基A型受体B2抗原

FLRT1重组人 FLRT1 蛋白 (His 标签) Protein

ANGPTL4 Protein Human 重组人 ANGPTL4 蛋白

LY9 Protein Mouse 重组小鼠 LY9 / CD229 / SLAMF3 蛋白 (His 标签)

GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2 0.5mgGABABR2/GB2(GABA B Receptor 2) γ1氨基A型受体B2抗原

ANGPTL4 Protein Human 重组人 ANGPTL4 蛋白

HEPACAM2重组大鼠 HepaCAM2 蛋白 (His 标签) Protein

LY9 Protein Mouse 重组小鼠 LY9 / CD229 / SLAMF3 蛋白 (His 标签)

FLRT1重组人 FLRT1 蛋白 (His 标签) Protein

猪骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/OCN/BGP)ELISA 试剂盒

Human connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 人结缔组织生长因子(CTGF)检测试剂盒

PorcineHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 猪热休克蛋白40(HSP-40)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha-FodrinIgG/IgA(Humanai-alpha-FodrinIgG/IgA)ELISAKit人抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA

血液精(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

Pisumsativumagglinin,PSAELISAKit豌豆凝集素(PSA)检测试剂盒

小鼠膈肌细胞猪补体蛋白3检测试剂盒   猪补体蛋白3试剂盒   规格型号
：96T/48T   猪补体蛋白3试剂盒，规格型号

：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：猪补体蛋白3试剂盒
、猪补体蛋白3eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

猪表皮生长因子检测试剂盒   猪表皮生长因子试剂盒   规格型号

：96T/48T   猪表皮生长因子试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：猪表皮生长因子试剂盒
、猪表皮生长因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期

：6个月。

猪白血病抑制因子受体检测试剂盒   猪白血病抑制因子受体试剂盒   规格型号：96T/48T   猪白血病抑制因子受体试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：猪白血病抑制因子受体试剂盒
、猪白血病抑制因子受体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪白细胞介素15检测试剂盒   猪白细胞介素15试剂盒   规格型号
：96T/48T   猪白细胞介素15试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：检测试剂盒（进口分装），产品别名：猪白细胞介素15试剂盒、猪白细胞介素15eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。