老哥俱乐部

细胞简介
：

巩膜是眼球壁的外一层，由致密的胶原和弹力纤维构成，其结构坚韧，不透明。巩膜前缘接角膜缘
，后方与视神经的硬膜鞘相延续。

巩膜由外向内分为：巩膜上层；主质层
；巩膜下层。其中上层是由上皮细胞构成
。

细胞特性
：

1） 组织来源于实验动物的正常眼组织
。

2) 细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性
。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和
。

5) 细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠白介素-5（IL-5）elisa检测试剂盒

JRKL蛋白样抗体

JRKL

细胞质膜微囊蛋白-2抗体

Caveolin-2

体液基质金属（MMP-9）活性荧光定量检测试剂盒

人富亮α2糖蛋白1(LRG1)elisa分析检测试剂盒

大鼠S转移酶α1(GSTα1)elisa检测试剂盒

鱼生长(GH)elisa检测试剂盒免费代测

粘蛋白12抗体

MUC12

FAM131C蛋白抗体

FAM131C

细胞骨架相关蛋白2抗体  Anti-TAGL2/TAGLN2

细胞衰老抑制基因蛋白抗体  Anti-RSL1D1

神经激肽A抗体  Anti-NKA/Neurokinin A

磺酰脲类受体1抗体  Anti-SUR1

ZC4H2蛋白抗体

ZC4H2

内布拉斯加犊牛腹泻病毒(NCDV) NSP4抗体

Nebraska Calf Diarrhea Virus NSP4

染色体结构维持蛋白1抗体  Anti-SMC1

钠钙交换蛋白2抗体  Anti-NCX2/SLC8A2

环指蛋白2抗体  Anti-RING2/RNF2

转录延伸调节蛋白1抗体  Anti-TCERG1/CA150

大鼠泛素蛋白(Ub)elisa分析检测试剂盒

肌动蛋白依赖染色质调控因子SMARCD3蛋白抗体 SMARCD3

组织血管紧张素Ⅰ转化酶2（ACE2）活性荧光定量检测试剂盒

人CC趋化因子7 (CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)elisa分析检测试剂盒

小鼠巩膜上皮细胞大鼠C型钠尿肽(CNP)elisa检测试剂盒