老哥俱乐部

细胞简介
：

鼓膜也称耳膜
，为一弹性灰白色半透明薄膜，将外耳道与中耳隔开。鼓膜穿孔不能，可能与干细胞受损或增殖抑制有关
。鼓膜上皮干细胞的分布与鼓膜的血供丰富的区域一致。

鼓膜上皮干细胞高表达 β1整合素，有很强的黏附型，对Ⅳ型胶原的黏附鼻其他细胞更快、更强。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常鼓膜组织
。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 角质形成 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa检测试剂盒

组蛋白赖N-甲基转移酶2B抗体

KMT2B

障碍自整合蛋白BAF重组兔单克隆抗体

BANF1

组织葡萄糖激酶（glucose kinase）比色法定量检测试剂盒

人干扰素调节因子3(IRF3)elisa分析检测试剂盒

大鼠胱抑素S(CST4)elisa检测试剂盒

鱼elisa分析检测试剂盒

NECAP1蛋白抗体

NECAP1

6号染色体开放阅读框58抗体

C6orf58

跨膜丝蛋白酶5抗体  Anti-TMPRSS5

磷酸化p21激活激酶2抗体  Anti-phospho-PAK2(Ser141)

泛素特异性蛋白酶OTB1抗体  Anti-OTUB1

14号染色体开放阅读框174  Anti-SAMD15/C14orf174

相似肿瘤抑制基因HUGL抗体

LLGL2

DNAJA4蛋白抗体

DNAJA4

玻璃粘连蛋白抗体  Anti-VTN/Vitronectin

核受体辅助抑制因子1抗体  Anti-NCoR1

视网膜色素上皮细胞特异性蛋白65抗体  Anti-RPE65

紧密连接蛋白2抗体  Anti-TJP2

大鼠白细胞抗原DR(HLA-DR)elisa分析检测试剂盒

血管非炎症分子1抗体  Anti-VNN1

Cy5.5标记的兔抗人IgG H&L

Rabbit Anti-Human IgG H&L / Cy5.5

小鼠鼓膜上皮干细胞磷酸化泛素连接酶NEDD4-2抗体