老哥俱乐部

细胞简介
：

角质形成细胞是一种不断分化的复层鳞状上皮细胞
，其分化的终阶是形成角蛋白
。根据角质形成细胞的发展阶段和特点

，从内向外可将其分为五层。基底细胞层又称层，棘细胞层
，颗粒层，透明层
，角质层
。

角质形成细胞的分化成熟表现为从基底层到向角质层的逐渐移行。在单一移行过程中，角质形成 ;细胞的形状和功能也逐渐发生着变化
，从单层柱状上皮的基底层到扁平的细胞核消失的角质层

。新生的基底细胞进入棘细胞层，然后上移到颗粒层的上层。

细胞特性
：

1）细胞来源于实验动物的正常皮肤组织
。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白((Pan Cytokeratin)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV

、支原体
、
、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代 角质形成 细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠氧化酶(XOD)检测试剂盒 
，英文名： XOD ELISA Kit

Rabbit oponin I (Tn- I) ELISA Kit 兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)检测试剂盒

脑膜奈瑟菌C群(NM-C)核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforMouselymphocytefactorELISAKit小鼠淋巴细胞因子

体液过氧化氢(HYDROGENPEROXIDE)活性化学发光法定量检测试剂盒20次

ELISAKit2,3-DPG人2,3-二0酸甘油酸

ACVRL1重组小鼠 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase 0.5mgCNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型尿肽抗原

LSAMP重组人 LSAMP 蛋白  Protein

ANXA5 Protein Human 重组人 ANXA5 / Annexin Ⅴ / Annexin A5 蛋白

IL13RA2 Protein Mouse 重组小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His 标签)

CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase 0.5mgCNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型尿肽抗原

ANXA5 Protein Human 重组人 ANXA5 / Annexin Ⅴ / Annexin A5 蛋白

ACVRL1重组小鼠 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

IL13RA2 Protein Mouse 重组小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His 标签)

LSAMP重组人 LSAMP 蛋白  Protein

猪肌球蛋白轻链0酸酶(MLCP)ELISA 试剂盒

Neuroophic factor glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)检测试剂盒

Porcineacetylcholine,ACHELISAKit 猪乙酰(ACh)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlphaNAG(MouseAlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶

血液离子(K)浓度化学比色法定量检测试剂盒20次

PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISAKit植物吲哚乙酸(IAA)检测试剂盒

小鼠角质形成细胞猪低分子肝素(LMWH)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪蛋白激酶A(PKA)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪胆囊收缩素/肠促肽(CCK)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。