老哥俱乐部

细胞简介：

颈动脉存在于脊椎动物颈部的动脉。有颈外动脉和颈内动脉，前者分布至头顶部和颜面部
，后者进入颅内分布至脑和眼眶内。血管发生一个主要因素是由于血管平滑肌细胞转变成为了具有繁殖能力的表型。

因此

，对动脉血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的血管的靶向方法
。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常颈动脉组织
。

2)细胞鉴定

：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 平滑肌 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品

：

HcyELISAKit

大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa分析检测试剂盒

MCP-3 ELISA kit

人结核菌素(Tuberculin)elisa分析检测试剂盒

HumanTuberculinELISAKit

细胞SPRK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

人基质金属蛋白酶4(MMP-4)elisa分析检测试剂盒

大鼠肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)elisa检测试剂盒

猪β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa分析检测试剂盒

鸽子白蛋白(Albumin)elisa分析检测试剂盒

Pigeon Albumin ELISA Kit

人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡ-Ab)elisa分析检测试剂盒

HSVⅡ-AbELISAKit

大鼠凋亡相关因子(FAS)elisa检测试剂盒

小鼠转化生长因子β诱导蛋白(TGFβI)elisa检测试剂盒

人促肾上腺皮质(ACTH)elisa分析检测试剂盒

肠出血性大肠埃希菌（Enterohaemorrhagic E. coli）鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒

E3泛素连接酶NEDD4结合蛋白1抗体

N4BP1

纤连蛋白2抗体

Fibulin 2

味觉受体蛋白家族2亚基60抗体  Anti-T2R60

磷酸化蛋白激酶C mu型抗体  Anti-phospho-PRKD1(Tyr463)

磷酸化一氧化氮合成酶3（内皮型）抗体  Anti-Phospho-eNOS (Thr495)

丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体  Anti-SEK1/MKK4/MAP2K4

Cy5.5标记的兔抗水IgG H&L

亚砷盐相关蛋白抗体  Anti-Spindly/CCDC99

PE-CY5标记的鼠抗人IgG H&L单克隆抗体

Mouse Anti-Human IgG H&L (3D3) mAb / PE-Cy5

小鼠颈动脉平滑肌细胞FAM9B蛋白抗体

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态

、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。