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GSG 酶联免疫分析试剂盒标本要求
1．标本采集后尽早进行提取

，提取按相关文献进行
，提取后应尽快进行实验
。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可向客服索取说明书》》 在线索取
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
、标准孔、待测样品孔
。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中 先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁
，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
。
5.洗涤
：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶

：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育

：操作同3。
8.洗涤
：操作同5。
9.显色
：每孔先加入显色剂A50μl
，再加入显色剂B50μl
，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10. 终止：每孔加终止液50μl
，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

GSG 酶联免疫分析试剂盒保证产品质量

，*，质量可靠，灵敏度高，效果稳定。等优点已经得到广大客户的认可，您可放心，且我司有专门的售后部门对您进行全线跟踪。
产品名称：
英文名称：Human SAP ELISA Kit
规格：96T/48T
存储条件：2-8℃
有效期：6个月
特异性:本ELISA检测试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。
检测种属：人
、大小鼠、兔
、羊、猴
、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
适用范围

：此试剂盒仅用于科研实验
，禁用于临床 。

类型和操作步骤
ELISA可用于测定抗原
，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体
，
②酶标记的抗原或抗体，
③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件
，可设计出各种不同类型的检测方法。
（一）双抗体夹心法
、
（二）一步法、
（三）间接法测抗体
、
（四）竞争法。
技术流程:
一、双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次
。
2、加样
：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中

，置37℃ 孵育1小时
。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时
，洗涤。
4、加底物液显色

：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5
、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果
：反应孔内颜色越深，阳性程度越强
，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处
，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性

。
二
、间接法(检测未知抗体)
1
、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml

， 每孔加0.1ml，4℃过夜
。次日洗涤3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤
。(同时做空白
、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml
，37℃孵育30-60分钟
，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
4

、加底物液显色
：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟
。
5
、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定
：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅

，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值
：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处
，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍

，即为阳性。