由於庚肝抗體IgM檢測試劑盒保存的特殊性 ，使得不少的操作者對冷凍後的產品產生了疑問 ：ELISA檢測試劑盒被冷凍後再使用有影響嗎 ？對此 ，我司ELISA檢測試劑盒技術員建議ELISA試劑盒解凍後一次用完 ，並作出解釋 ：

　　ELISA檢測試劑盒的保質期一般都是在一年 ，如果保存得當的話 ，不會出現問題的 。但不要反複凍融 。當然如果是正常的ELISA試劑盒 ，應該放在4℃左右冰箱保存 。

　　但要注意的是 ，如果將試劑盒剛從冰箱裏麵拿出來就立即使用的話 ，可能會影響，其直接的後果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性 。建議 ：先從冰箱中拿出來 ，在室溫下放置20分鍾以上後 ，再進行測定 ，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡 。這樣做的目的 ，主要是為了在後麵的溫育反應步驟中 ，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度 ，以滿足測定要求 。

　　已開封或者使用後 ，剩餘試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存 ，ELISA檢測試劑盒開封後的酶標板要加幹燥劑後密封保存於-20℃ ，避免潮濕 。

　　庚肝抗體IgM檢測試劑盒操作步驟

　　1.包被過程(注意設置空白對照 ，陰性對照) ：

　　將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg) ，每孔抗原加入100μl ，置37℃ ，4h ，或4℃ ，24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發 ，板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中) 。

　　2.封閉酶標反應孔 ：

　　5%小牛血清置37℃封閉40min ，封閉時將封閉液加滿各反應孔 ，並去除各孔中的氣泡 ，封閉結束後用洗滌液滿孔洗滌3遍 ，每遍3min 。

　　洗滌方法 ：吸幹孔內反應液 ，將洗滌液注滿板孔 ，放置2min略作搖動 ，吸幹孔內液 ，傾去液體後在吸水紙上拍幹 。洗滌次數3次

　　3.加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度) ：

　　檢測時一般采用1 ：50-1 ：400的稀釋度 ，應采用較大稀釋體積進行 ，一般保證樣品吸取量>20μl 。

　　將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中 ，每樣品至少加雙孔 ，每孔100μl ，置於37℃ ，40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍 ，每遍3min 。

　　4.加入酶標抗體 ：

　　酶標抗體 ：根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行 ，37℃ ，30-60min之間 ，短於30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前 。

　　5.加入底物液(現用現配) ：

　　選TMB-過氧化氫尿素溶液 ，OPD-過氧化氫底物液係統次之 。

　　底物加入量 ：每孔100μl ，置37℃避光放置3-5分鍾 ，加入終止液顯色 。

　　6.終止反應 ：

　　每孔加入終止液50μl終止反應 ，於20min內測定實驗結果 。

　　7.結果判斷 ：

　　庚肝抗體IgM檢測試劑盒OPD顯色後采用492nm波長 ，TMB反應產物檢測需要450nm波長 。檢測時一定要首先進行空白孔係統調零 ，用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示 ，當P/N大於2時作為抗體的效價 。(數值的大小依具體檢測要求而定)