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E2檢測ELISA試劑盒實驗小知識----顯色問題
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:570 更新時間
:2020-05-26
E2檢測ELISA試劑盒實驗中顯色是ELISA中的後一步溫育反應
,此時酶催化無色的底物生成有色的產物
。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內
,陰性孔可保持無色
,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強
。適當提高溫度有助於加速顯色進行
。在定量測定中
,加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確
。定性測定的顯色可在室溫進行
,時間一般不需要嚴格控製
,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯se情況適當縮短或延長反應時間
,及時判斷
。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鍾後即不再加深
,再延長反應時間
,可使本底值增高
。OPD底物液受光照會自行變色
,顯色反應應避光進行
,顯色反應結束時加入終止液終止反應
。OPD產物用硫酸終止後
,顯色由橙黃色轉向棕黃色
。E2檢測ELISA試劑盒
TMB受光照的影響不大
,可在室溫中置於操作台上
,邊反應觀察結果
。但為保證實驗結果的穩定性
,宜在規定的適當時間閱讀結果
。TMB經HRP作用後
,約40分鍾顯色達
,隨即逐漸減弱
,至2小時後即可*消退至無色
。TMB的終止液有多種
,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑製劑均可使反應終止
。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪
,是目視判斷的良好終止劑
。此外
,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色
,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值
。E2檢測ELISA試劑盒
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