通常在板孔中加入包被液後
,在4-8℃冰箱中放置過夜
,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果
。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化
,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定
。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml
。
封閉是否必要
,取決於ELISA的模式及具體的實驗條件
。並非所有的ELISA固相均需封閉
,封閉不當反而會使陰性本底增高
。一般說來
,雙抗體夾心法
,隻要酶標記物是高活性的
,操作時洗滌*
,不經封閉也可得到滿意的結果
。特別是用單抗腹水直接包被時
,因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表麵
,業已起到了類似封閉劑的作用
。但在間接法測定中
,封閉一般是不可少的(見2.2.2)。包被好的ELISA板幹燥後放入密封袋或錫袋中
,在低溫可保存數月
。
封閉(blocking)是繼包被之後用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程
。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,吸收後固相載體表麵尚有未被占據的空隙
,封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙
,從而排斥在ELISA試劑盒其後的步驟中幹擾物質的再吸附
。封閉的手續與包被相類似
。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白
,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的
。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其zui大的特點是價廉
,可以高濃度使用(5%)
。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用
,但由於奶粉的成份複雜
,而且封閉後的載體不易保存
,因此在試劑盒的製備中較少應用
。
151006-14-3 普伐他汀1
,1
,3
,3-四甲基氨基丁烷標準品 200mg
1508-76-5 Procyclidine Hydrochloride 鹽酸丙環定標準品 200mg
1508-75-4 Tropicamide 標準品 200mg
1508-65-2 Oxybutynin Chloride 氯化奧昔布寧標準品 200mg
150399-21-6 Balsalazide Disodium 標準品 200mg
150-13-0 Aminobenzoic Acid 氨苯甲酸標準品 200mg
149845-06-7 Saquinavir Mesylate 甲磺酸沙奎拉韋標準品 200mg
149-32-6 Erythritol 赤蘚糖醇標準品 200mg
148408-66-6 Docetaxel 三水多烯標準品 200mg
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