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。今天老哥俱樂部就談ELISA中陰性本底的形成原因
。酶聯固相免疫實驗中
,尤其在簡介ELISA法中
,經常會碰到陰性本底的問題
。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大
。本底或稱背景
,是ELISA中的非特異性顯色
。底物未經過酶作用而呈現的顏色稱為空白
。底物液如配製不當會出現一定的空白值
。這個空白值隻要不太高(A<0.05)
,可從個測定值中減除
,並不影響實驗結果
。這裏研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中出現的本底
。從理論上講
,隻有陽性標本zui終才能引出顯色反應
,在以下情況
ELISA試劑盒在酶免疫測定中
,ELISA的特點是利用固相載體作為分離遊離和結合的酶結合物的手段
。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體
,即免疫吸附劑
。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表麵主要是疏水基團
,通過疏水鍵與蛋白質結合
。之中吸附式物理性的非特異性吸附
,雖然蛋白質的分子量
、等電點
、濃度等對吸附的量有一定的影響
,但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體的表麵
。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上
,在ELISA各個步驟中均有可能發生幹擾物質的吸附
,使zui終產生與受檢抗原-抗體反應無關的顯色
,這是形成本底的主要原因
。
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