封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點 。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會 。您當然也希望抗體隻與目的蛋白結合吧 。如果您的背景過高 ，懷疑封閉不充分 ，那麽您可以嚐試使用更高濃度的封閉液 ，或適當延長封閉時間 。
如果您一直被背景問題所困擾 ，那麽也許您該花些時間來優化封閉液 。這可能需要時間 ，但也是值得的 。目前主要有兩種類型的封閉液 ：蛋白和非離子型去汙劑 。您使用的類型須取決於多個因素 ，包括微孔板的表麵試劑 、吸附的抗原 、您的抗體和檢測試劑 。好的封閉液應降低非特異性結合 ，但它不應當與抗原 、抗體或檢測試劑發生相互作用 。
zui常用的非離子型去汙劑是Tween-20 。這種封閉液便宜 、穩定 ，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用 。但它們隻在存在時起作用 ，因為很容易被洗掉 。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%) ，它會降低特異結合 ，產生假陰性 。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去汙劑這兩種封閉液 ，後者可協助洗滌過程中的封閉 。
蛋白封閉液則有所不同 ，是*的 。它們與開放位點結合並封閉 ，同時穩定與微孔板結合的抗原分子 。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉 、正常血清和魚明膠 。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用 。不過 ，它的缺點在於能與Protein A和IgG抗體相互作用 。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清 。

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