溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為樞紐的一個因素 。目前臨床上使用血清標本測定的標誌物一般有傳染性病原體的抗原和抗體 、腫瘤標誌物、激素 、特種蛋白 、細胞因子和治療藥物等 。試劑的加入在ELISA試劑盒國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加 ，除了要留意滴加的角度外 ，滴加的速度也很重要 ，滴加太快 ，很輕易泛起重複滴加或加在兩孔之間的現象 ，這樣就會在孔內的非包被區泛起非特異吸附 ，從而引起非特異顯色 。如可的鬆在早晨4～6點之間 ，會有一峰值泛起 ：生長激素 、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發性方式開釋 ，因此，在測定此類激素時 ，有必要在緊密親密相連的時間距離內采取數份血樣本 ，以其中間值為測定值 。ELISA試劑盒因此在ELISA測定中試劑的預備zui為樞紐的是 ，在實驗開始前 ，將試劑盒先從冰箱中拿出來 ，在室溫下放置20分鍾以上後 ，再進行測定 ，以使試劑盒在使用前與室溫平衡 。ELISA試劑盒加血清樣本及反應試劑在現在的ELISA試劑盒中 ，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟 。 

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