1.標準品的稀釋 ：本試劑盒提供原倍標準品一支 ，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。
600pg/ml5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
300pg/ml4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
150pg/ml3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
75pg/ml2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
37.5pg/ml1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同） 、標準孔 、待測樣品孔 。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl ，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl ，然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。
3.溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
4.配液 ：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5.洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。
6.加酶 ：每孔加入酶標試劑50µl ，空白孔除外 。
7.溫育 ：操作同3 。
8.洗滌 ：操作同5 。
9.顯色 ：每孔先加入顯色劑A50µl ，再加入顯色劑B50µl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色10分鍾.
10.終止 ：每孔加終止液50µl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11.測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。測定應在加終止液後15分鍾以內進

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