結果“花板”的問題對檢測數據造成了很大影響,往往會使檢測者做出誤判 ,是實驗中必須要注意和避免的 。
使用對血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實驗檢測的結果中 ,空白和陰性 ,陽性對照以及室內質控孔結果正常 ,根據衛生部臨檢中心提供的數據 ,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常範圍均為2NCU ,但血液標本孔的OD值比較高(大多數OD值≥0.070) 。標本的陽性率很高 ,每板除對照孔外 ,有時陽性高達10孔之多 ,而大多數真陽性標本都出現弱陽性結果 。
針對這種“花板”現象老哥俱樂部通過多次實驗的分析和判斷,總結了一些經驗 ,分析如下:
1 ELISA實驗標本 、試劑 、儀器
1.1 標本 出入境人員的血液標本 。
1.2 試劑 HBsAg 、HCV 、HIV 、梅毒試劑均為不同的ELISA試劑盒 。
1.3 儀器 LD4-2型腦心機BID RAD1575型洗板機BID RAD550酶標儀 。
2 方法
所有被檢出入境人員的血液標本 ,按照各個提供的ELISA試劑盒說明書進行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作 。所有試劑均在有效期內使用 。
3 結果
所使用不同的試劑有時會出現“花板”問題 。
4 分析
在所有標本進行檢測的過程中 ,所用的儀器及加樣過程都處於正常狀態的情況下 ,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做 ,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響外 ,ELISA試劑盒內的空白 、陰性和陽性對照以及室內質控值都很正常 ,隻有檢測的血液標本情況異常 。根據國家和疾控中心報告陽性率的比例不應該是很高的情況下 ,HBsAg在用ELISA之前都經過了快速金標試劑的檢測 ,陽性標本得到了一定的控製 。因此 ,原因可能是在標本的處理 ,特別是放置時間 、離心速度和離心時間方麵的問題 。所以 ,標本的處理就成為實驗結果的主要可疑因素 。
為了避免“花板”現象的出現 ,降低檢測的假陽性率 ,獲取準確的實驗結果 ,應選擇靈敏度高 、特異性好 、穩定性好 、批間差小 、操作方便省時的ELISA試劑 。
實驗過程中應該注意的問題:
(1)抽取樣本時應抽出足夠檢驗量的血液標本 ,按比例加抗凝劑 ,便於離心 ,得到足夠的血清(血漿) 。
(2)血液標本應置於室溫下1~2h ,使血液凝固收縮 ,然後離心檢測或讓血液過夜後再檢測 。這樣才能使得血液充分收縮 ,讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至zui低 。
(3)檢測之前 ,加大離心轉速 ,盡量延長時間 ,使血細胞和纖維蛋白充分沉澱 ,讓血細胞與血清*分離 。
(4)加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白 ,要按照操作說明書去做 ,否則會影響實驗結果 。
(5)封板溫育時 ,各孔一定要封嚴 ,防止陽性標本的液體蒸發 ,產生周邊現象從而導致“花板”的出現 。
(6)手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出 ,連成整體液麵後產生“花板” 。用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物 ,這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現 。
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