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​蛋白磷酸酶抑製劑混合液III型熒光定量PCR實驗步驟
點擊次數 :552 更新時間 :2022-03-01

熒光定量PCR實驗步驟 :

①取凍存已裂解的細胞 ,室溫放置5分鍾使其*溶解 。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang ,蓋緊管蓋 。手動劇烈振蕩管體15秒後 ,15到30℃孵育2到3分鍾 。4℃下12000rpm離心15分鍾 。離心後混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相 ,中間層以及無色水相上層 。RNA全部被分配於水相中 。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60% 。

③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中 。加等體積異丙醇混合以沉澱其中的RNA ,混勻後15到30℃孵育10分鍾後 ,於4℃下12000rpm 離心10分鍾 。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側壁上形成膠狀沉澱塊 。

④RNA清洗 移去上清液 ,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配製) ,清洗RNA沉澱 。混勻後 ,4℃下7000rpm離心5分鍾 。

⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液 ,使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾 。

⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時 ,先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次,使其*溶解 ,獲得的RNA溶液保存於-80℃待用 。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零 。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後 ,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值 ,測定RNA溶液 濃度和純度 。

轉錄因子E2F-1抗體

內皮素轉化酶1抗體

細胞外基質蛋白1抗體

外胚層發育不良抗體

E2 tag標簽抗體

鐵螯合酶抗體

DH5α大腸杆菌菌體蛋白抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體

上皮細胞粘附分子抗體

表皮生長因子抗體

表皮生長因子受體3抗體

上皮鈣粘附分子抗體

紅細胞生成素受體抗體

腦啡肽抗體

EID2蛋白抗體

上皮細胞粘附分子抗體

紅細胞膜相關蛋白ERMAP抗體

腺樣癌特異性相關抗原抗體EMC1抗體

腺樣癌特異性相關抗原抗體EMC1抗體

染色體區域穩定蛋白/核輸出蛋白1抗體


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