測定步驟 :
1.加樣
1.除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣 ,不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本後和加結合物後 ,應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱 。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發 ,板上應加蓋 ,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中 。
4.加入底物後 ,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高於20℃ ,ELISA板可避光放在實驗台上 ,以便 不時觀察 ,待對照管顯色適當時 ,即可終止酶反應 。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟 ,但卻 是決定實驗成敗的關鍵 。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附於固相載體的幹擾物質 。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺 ,在定性測定中一般 可采用目視比色 。
2.如用酶標儀測定結果 ,準確性決定於ELISA板底的平整與透明度 、酶標儀的質 量和軟件的算法 。
實驗結果判斷我有妙招 :
1 、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量 。
2 、以樣品孔的OD值大於陰性對照OD值+2~3SD ,作為陽性結果的閾值 。
3 、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大於或等於2.1為陽性 ,P/N值小於2.1 ,但大於1.5為可疑 ,P/N小於1.5為陰性 。
4 、ELISA試劑盒目測定性法 :加入底物經酶解和終止反應後 ,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深於(競爭法則淺於)陰性對照 ,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性 。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求 :
① 易揮發 、低燃點的試劑要密封 ,放於陰涼 、通風 、遠離火源處保存 。
② 與水蒸氣 ,水發生反應的物質要密封 ,並遠離水源保存 。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存 ,不宜長期存放其水溶液 ,亞硫酸 ,氫硫酸溶液要密封存放 ,鉀 ,鈉 ,白磷更要采用液封形式 。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存 ,其相應的溶液較固體更易反應 ,所以更要注意密封保存 。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封 ,放於陰涼通風處保存 。
ARMCX3ARM重複X連鎖蛋白ARMCX3抗體
ARMCX1ARM重複X連鎖蛋白ARMCX1抗體
ARMCX2ARM重複X連鎖蛋白ARMCX2抗體
Apg10自噬相關蛋白10抗體
Aminoacylase 1氨基酰化酶1抗體
Adipose Triglyceride Lipase脂肪甘油三酯脂酶抗體
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
Amphiregulin雙調蛋白(結腸直腸細胞源性生長因子)抗體
phospho-AQP2(Ser264)磷酸化水通道蛋白2抗體
AXL粘附相關激酶抗體
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)磷酸化粘附相關激酶抗體
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-AQP2(Ser269)磷酸化水通道蛋白2抗體
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743)磷酸化APP澱粉樣肽前體蛋白抗體
phospho-AKT1(Ser129)磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198)磷酸化APP澱粉樣肽前體蛋白抗體
phospho-ATF4 (Ser245)磷酸化活化轉錄因子4抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser213)磷酸化雄激素受體抗體