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      小鼠结缔组织L细胞株929克隆细胞株培养的具体无菌技术要点
      点击次数:798 更新时间  :2021-06-23

      细胞株培养的具体无菌技术要点:
      1. 实验开始前,无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟*灭菌,用70%ethanol擦拭无菌操作台面,并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后 ,才可以进行实验操作 。每次操作只能处理一株细胞株 ,即使培养基*相同也不可共用培养基 ,以避免细胞间污染或失误混淆 。实验完成后,请将实验物品拿出工作台,用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后,才能进行下一个细胞株的操作。
      2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞 ,必要物品(试管架、吸管 、吸取器或吸管盒等)可以暂时放置 ,其它实验用品使用完毕后应移出,有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的无菌区域内完成,请勿在边缘非无菌区域进行操作。
      3. 小心取用无菌实验物品,避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处,也不要在打开的容器正上方进行操作 。容器打开后 ,请用手夹住瓶盖并轻握瓶身,倾斜大约45°角取用,尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。
      4. 工作人员应当首先注意自身安全,必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作 ,并选择适当等级的无菌操作台进行(至少是Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol的产生 ,小心有毒性药品,例如DMSO和TPA等,并避免针头的伤害等等。
      5. 定期检测下列项目:
      5.1. CO2钢瓶的CO2压力
      5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染(水盘的水需用无菌水,每周定时更换)。
      5.3. 无菌操作台内的airflow压力,定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000小时/HEPA)。
      6. 水槽内可添加消毒剂(Zephrin 1:750) ,需定期更换水槽中的水 。

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