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      普通变形杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒RNA质量检测
      点击次数 :791 更新时间 :2021-05-20

      RNA质量检测 :
      1)紫外吸收法测定
      先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后 ,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度 。
      浓度测定
      A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml 。具体计算如下:
      RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀释至495的TE中,测得A260 = 0.21
      RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
      取5ul用来测量以后,剩余样品RNA为35 l ,剩余RNA总量为:
      35 l × 0.84 gl = 29.4 g
      ②纯度检测
      RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度 ,比值范围1.8到2.1。
      2)变性琼脂糖凝胶电泳测定
      ①制胶
      1g琼脂糖溶于72ml水中 ,冷却至60℃ ,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% (12.3 M)。
      10×MOPS电泳缓冲液
      浓度 成分
      0.4M MOPS,pH 7.0
      0.1M 乙酸钠
      0.01M EDTA
      灌制凝胶板 ,预留加样孔至少可以加入25 l溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

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