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普通變形杆菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒RNA質量檢測
點擊次數 :557 更新時間 :2021-05-20

RNA質量檢測 :
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零 。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後 ,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值 ,測定RNA溶液 濃度和純度 。
濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml 。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為 :A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml 。具體計算如下 :
RNA溶於40 l DEPC水中 ,取5ul ,1:100稀釋至495的TE中 ,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以後 ,剩餘樣品RNA為35 l ,剩餘RNA總量為 :
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度 ,比值範圍1.8到2.1 。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①製膠
1g瓊脂糖溶於72ml水中 ,冷卻至60℃ ,10 ml的10× MOPS電泳緩衝液和18 ml的37% (12.3 M) 。
10×MOPS電泳緩衝液
濃度 成分
0.4M MOPS ,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌製凝膠板 ,預留加樣孔至少可以加入25 l溶液 。膠凝後取下梳子 ,將凝膠板放入電泳槽內 ,加足量的1×MOPS電泳緩衝液至覆蓋膠麵幾個毫米 。

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