的間接法
:
1.用包被緩衝液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml
,每孔加0.1ml
,4℃過夜
。
2.次日洗滌3次
。
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌
。(同時做空白
、陰性及陽性孔對照)於反應孔中
,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml
,37℃孵育30-60分鍾
,洗滌,最後一遍用DDW洗滌
。
4. 加底物液顯色
:於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml
,37℃10~30分鍾
。
5. 終止反應
:於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
。
6. 結果判定
:可於白色背景上
,直接用肉眼觀察結果
:反應孔內顏色越深
,陽性程度越強
,陰性反應為無色或極淺
,依據所呈顏色的深淺
,以“+”
、“-”號表示
。也可測O·D值
:在ELISA檢測儀上
,於450nm(若以ABTS顯色
,則410nm)處
,以空白對照孔調零後測各孔O·D值
,若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍
,即為陽性
。
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