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ET-1 elisa酶聯免疫試劑盒雙抗體夾心法
點擊次數 :517 更新時間 :2021-02-20

雙抗體夾心法 :

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml 。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml ,4℃ 過夜 。次日 ,棄去孔內溶液 ,用洗滌緩衝液洗3次 ,每次3分鍾 。(簡稱洗滌 ,下同) 。
2. 加樣 :加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中 ,置37℃ 孵育1小時 。然後洗滌 。(同時做空白孔 ,陰性對照孔及陽性對照孔) 。
3. 加酶標抗體 :於各反應孔中 ,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定後的稀釋度)0.1ml 。37℃ 孵育0.5~1小時 ,洗滌 。
4. 加底物液顯色 :於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml ,37℃ 10~30分鍾 。
5. 終止反應 :於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 。
6. 結果判定 :可於白色背景上 ,直接用肉眼觀察結果 :反應孔內顏色越深 ,陽性程度越強 ,陰性反應為無色或極淺 ,依據所呈顏色的深淺 ,以“+” 、“-”號表示 。也可測OD值 :在ELISA檢測儀上 ,於450nm(若以ABTS顯色 ,則410nm)處 ,以空白對照孔調零後測各孔OD值,若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍 ,即為陽性 。

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