使用操作步驟 ：

1．   使用前 ，將所有試劑充分混勻 。不要使液體產生大量的泡沫 ，以免加樣時加入大量的氣泡 ，產生加樣上的誤差 。

2．   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數 。每個標準品和空白孔建議做複孔 。每個樣品根據自己的數量來定 ，能使用複孔的盡量做複孔 。

3．   加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔 、加入待測樣品50ul於反應孔內 。立即加入50ul的標記的抗體 。蓋上膜板 ，輕輕振蕩混勻 ，37℃溫育45分鍾 。

4．   甩去孔內液體 ，每孔加滿洗滌液 ，振蕩30秒 ，甩去洗滌液 ，用吸水紙拍幹。重複此操作4次 。如果用洗板機洗滌 ，洗滌次數增加一次 。

5．   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP ，輕輕振蕩混勻 ，37℃溫育30分鍾 。

6．   甩去孔內液體 ，每孔加滿洗滌液 ，振蕩30秒 ，甩去洗滌液 ，用吸水紙拍幹 。重複此操作4次 。如果用洗板機洗滌 ，洗滌次數增加一次 。

7．   每孔加入底物A 、B各50ul ，輕輕振蕩混勻 ，37℃溫育5分鍾 。避免光照 。

8．   取出酶標板 ，迅速加入50ul終止液 ，加入終止液後應立即測定結果 。

9．   在450nm波長處測定各孔的OD值 。

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