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      上海肉芽肿鞘杆菌PCR检测试剂盒使用方法
      点击次数 :1045 更新时间:2020-11-03

      使用方法 :
      测定法的灵敏度来自作为报告的酶。*,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
      1. 标准品的稀释 :本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
       12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
       6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
       3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
       1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
      2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50μl ,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀 。|
      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
      4. 配液 :将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
      5. 洗涤:小心揭掉封板膜 ,弃去液体 ,甩干 ,每孔加满洗涤液 ,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
      6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
      7. 温育:操作同3。
      8. 洗涤:操作同5 。
      9. 显色 :每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
      10. 终止:每孔加终止液50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
      11. 测定:以空白空调零 ,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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