猴型逆轉錄病毒PCR試劑盒檢測方法 ：
1.Ⅰ法
：
在PCR反應體係中
，加入過量SYBR熒光染料
，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後
，發射熒光信號
，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號
，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步
。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法
：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收
；PCR擴增時
，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解
，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離
，從而熒光監測係統可接收到熒光信號
，即每擴增一條DNA鏈
，就有一個熒光分子形成
，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步
。
取凍存已裂解的細胞
，室溫放置5分鍾使其*溶解
。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang
，蓋緊管蓋
。手動劇烈振蕩管體15秒後
，15到30℃孵育2到3分鍾
。4℃下12000rpm離心15分鍾
。離心後混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相
，中間層以及無色水相上層
。RNA全部被分配於水相中
。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
。
③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中
。加等體積yibing醇混合以沉澱其中的RNA
，混勻後15到30℃孵育10分鍾後
，於4℃下12000rpm 離心10分鍾
。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側壁上形成膠狀沉澱塊
。
④RNA清洗 移去上清液
，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%yi醇(75%yi醇用DEPCH2O配製)
，清洗RNA沉澱
。混勻後
，4℃下7000rpm離心5分鍾
。
⑤RNA幹燥 小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾
。
⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時
，先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次
，使其*溶解
，獲得的RNA溶液保存於-80℃待用
。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零
。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)後
，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值
，測定RNA溶液 濃度和純度
。