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鼠附紅細胞體探針法熒光定量PCR試劑盒數據處理
點擊次數 :683 更新時間 :2020-04-14

樣品 RNA 的製備

如果有N個樣品 ,*設置N+2個提取 ,多出的一個是PC(樣品製備陽性對照) ,一個是 NC(樣品製備陰性對照) 。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次製備要求的體積一樣 ,以此作為PC 。另外用水作為NC 。 用自選方法純化樣品的RNA ,本試劑盒跟市場上大多數病毒RNA提取試劑盒兼容 。也以選購本公司的柱式病毒RNAout 。本試劑盒免費贈送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝 ,該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板 ,省略了RNA提取步驟 。

數據處理

如果把本試劑盒用於定量檢測 ,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸 ,以 Ct值為縱軸 ,繪製標準曲線 。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值 ,再推算出其濃度 。把本試劑盒用於定性檢測 ,隻判斷陽性或陰性 ,則陰性對照 Ct 必須大於或等於 40 。陽性對照必須有熒光對數增長 ,有典型擴增曲線 ,Ct 值應該小於或等於 30 。對待測樣品 ,如果其 Ct 大於或等於 40 則為陰性 ,如果小於或等於 35 則為陽性 。如果在 35-40 之間 ,則重複一次 。重複實驗的 Ct值如果大於或等於 40 則為陰性 ,如果小於 35 ,則為陽性 。

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