操作步驟

1.  標準品的稀釋 ： 本試劑盒提供原倍標準品一支 ， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。

100pg/ml  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

50pg/ml  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

25pg/ml  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

12.5pg/ml  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

6.25pg/ml  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.  加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同）  、標準孔 、待測樣品孔 。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl ， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl ，然後再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）  。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。

3.  溫育 ：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾 。

4.  配液 ：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

5.  洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置 30 秒後棄去 ，如此

重複 5 次 ，拍幹 。

6.  加酶 ：每孔加入酶標試劑 50μl ，空白孔除外 。

7.  溫育 ：操作同 3 。

8.  洗滌 ：操作同 5 。

9.  顯色 ：每孔先加入顯色劑 A50μl ，再加入顯色劑 B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色

10 分鍾.

10. 終止 ：每孔加終止液 50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色）  。

11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）  。 測定應在加終止液後 15 分鍾以內進行 。

計算 ：

以標準物的濃度為橫坐標 ，OD 值為縱坐標 ，在坐標紙上繪出標準曲線 ，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度 ；再乘以稀釋倍數 ；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式 ， 將樣品的 OD 值代入方程式 ， 計算出樣品濃度 ， 再乘以稀釋倍數 ，即為樣品的實際濃度。

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