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淺析E2檢測ELISA試劑盒基礎小知識
點擊次數：751 更新時間
：2019-12-28
淺析E2檢測ELISA試劑盒基礎小知識
E2檢測ELISA試劑盒樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
：使用不含熱原和內毒素的試管
，操作過程中避免任何細胞刺激
，收集血液後
，3000轉離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
：EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000轉離心30分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
：3000轉離心10分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
：將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000轉離心10分鍾取上清
。
5. 保存
：如果樣本收集後不及時檢測
，請按一次用量分裝
，凍存於-20℃
，避免反複凍融
，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃
，使用前室溫平衡20分鍾
。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶
，這屬於正常現象
，水浴加熱使結晶*溶解後再使用
。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中
，密封（低溫幹燥）保存
。
3. 標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白
；預處理後的樣本無需稀釋
，直接取10μL加樣即可
。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間
、加液量及順序進行溫育操作
。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻
。
E2檢測ELISA試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條
，剩餘板條用自封袋密封放回4℃
。
2. 設置標準品孔和樣本孔
，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
；
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL
，再加樣本稀釋液40μL
；
4. 隨後標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL
，用封板膜封住反應孔
，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min
。
5. 棄去液體
，吸水紙上拍幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min
，甩去洗滌液
，吸水紙上拍幹
，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）
。
6. 每孔加入底物A
、B各50μL
，37℃避光孵育15min
。
7. E2檢測ELISA試劑盒每孔加入終止液50μL
，15min內
，在450nm波長處測定各孔的OD值
。
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