實驗條件
固相載體
:可作為固相載體的物質很多
,如
:纖維素
、聚丙烯酰胺
、聚苯乙烯
、聚丙烯
、交聯葡聚糖
、玻璃
、矽橡膠
、瓊脂糖凝膠等
。可以各種形式出現
;試管
、微量反應板凹孔
、小珠.....
。zui常用的是聚苯乙烯製品
,其吸附性
。固相包被的機製一般不外乎物理吸附和共價交聯
,
封閉
:以無關蛋白占據載體上未被包被的空隙
,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清
。
待測樣品
:稀釋度要合適
,濃度太大會發生非特異性吸附造成假陽性
,過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應
。選擇zui適稀釋度
,在實驗體係中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜
。
酶結合物
:使用高質量的酶結合物是elisa成功的關鍵
。
ELISA試劑盒SCI文章注意事項
酶聯免疫技術的試劑標準化問題尚未完*
,溫育過程的時間
、溫度
、洗滌液的種類及洗滌次數都是影響zui後測定的因素
。為使實驗得到滿意的結果
,在操作過程中應作到
1
、每次試驗都必須設陽性和陰性對照
。
2
、封閉要*
。
3
、洗滌要測定
。
ELISA試劑盒SCI文章操作流程
:
檢測抗體多用間接型elisa
。以純化抗原包被載體
,經4℃
,以無關蛋白封閉至少2小時以上
,加入待測樣品
,室溫孵育1小時
,洗滌幹淨後加酶標抗體
,再經室溫孵育
、洗滌後
,以底物顯色
,顯色到一定程度終止反應
,在酶標儀上讀結果或以肉眼判斷
。
類型
:elisa具體方法的類型繁多
,試劑的標準化問題還未zui後解決
,溫育的時間
、溫度
、洗滌液的種類及洗滌次數等都是影響測定的因素
。但參考以上基本過程
,無論怎樣變化
,均離不開抗原-抗體反應
、酶標抗體的免疫學反應及酶催化作用
。
特點
:
1
、敏感性高
,可檢出濃度在ug~mg/ml水平
;
2
、特異性強
;
3
、重複性好
;
4
、快速
、簡便
、廉價
。