老哥俱樂部通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟 ，但是如果試劑稍有不同 ，則可能需要優化抗體的量 。記住 ，非特異的抗體結合會增加背景 。為了防止這一點 ，切勿使用過多的一抗或二抗 。

檢測試劑要適量
     另一點也很顯而易見 ：切勿使用過多的檢測試劑 。如果濃度過高 ，或者未正確稀釋 ，則會導致高背景 。也不要顯色過度 ，如有必要 ，優化一下何時應加入終止液 。

洗滌很關鍵
      洗滌步驟看似很無聊 ，其實很重要 ，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中 ，那麽它會增加背景噪音 。如有必要 ，可增加洗滌液中的鹽濃度 ，這會阻止非特異結合反應 。如果ELISA試劑盒實驗背景過高 ，而您懷疑洗滌不夠時 ，可以嚐試增加洗滌次數 。

      常用的非離子型去汙劑是Tween-20 。這種封閉液便宜 、穩定 ，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用 。但它們隻在存在時起作用 ，因為很容易被洗掉 。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液 。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%） ，它會降低特異結合 ，產生假陰性 。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去汙劑這兩種封閉液 ，後者可協助洗滌過程中的封閉 。

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