老哥俱乐部

     老哥俱乐部通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤
，但是如果试剂稍有不同
，则可能需要优化抗体的量。记住
，非特异的抗体结合会增加背景
。为了防止这一点
，切勿使用过多的一抗或二抗。

检测试剂要适量
     另一点也很显而易见
：切勿使用过多的检测试剂
。如果浓度过高
，或者未正确稀释
，则会导致高背景
。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

洗涤很关键
      洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料（如非特异结合的抗体或检测试剂）残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果ELISA试剂盒实验背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

      常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜
、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度（正常浓度为0.01-0.1%），它会降低特异结合

，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭
。

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