製作感受態細胞大全方法
A液1M,MnCl2
B液
:1M
,HEPES
,pH=6.2-6.8
,用無菌水配
,配後不需滅菌
;
C液 稱取CaCl2 0.10g
,KCl 1.18g
,全部轉入細口試劑瓶
,然後加入46ml三蒸水
,輕輕振蕩使所有組分充分溶解
。將瓶塞蓋上並用牛皮紙
、棉線包紮
,然後放入滅菌鍋121℃高壓滅菌備用
。
取1管B液(0.6ml)
,全部加入C液(46ml)中
,混勻後
,再用1ml移液器加入3.3ml A液
,混勻冰浴即可使用
。
ELISA試劑盒挑取2-4個形態飽滿的單菌落接種於裝有100ml SOB 培養基的三角瓶,37℃劇烈振蕩(300 rpms)培養3-4小時
,將培養溫度調至18℃劇烈振蕩(3280 rpms)培養
,其餘與普通感受態差不多
,每管加入4ml TB緩衝液
,輕輕振蕩
,使菌體重新懸浮
,加入280ml DMSO(可用國產分析純)
,混勻後分裝入1.5ml EP管
,冰上靜置15分鍾
。用紗布將所有裝有感受態的EP管包好
,用棉線係好後放入液氮中速凍,在液氮中靜置12小時以上
。取出感受態放入-70℃超低溫冰箱備用
。效率非常高
,一般可到10*8
,好時可到10*9
,特別適宜於大片段與文庫構建及珍貴材料的連接轉化
。
含量測定 50mg 100242-200402
含量測定 50mg 100244-200502
檢查用 50mg 100247-199601 鈉
含量測定 100mg 100248-200802 12
含量測定 100mg 100249-200902
含量測定 100mg 100252-200703 亞鈣
含量測定 50mg 100253-200201
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