基因現已整合到銀耳基因組中
;RT-PCR成果顯現
,在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA
;Southern雜交成果表明人胰島素基因以單複製的方式整合到銀耳基因組DNA中
。本試驗經過設置農杆菌與銀耳芽孢不同共培育時刻
、誘導劑乙酰丁香酮的濃度
、銀耳芽孢及農杆菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉化功率影響
,成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL
、農杆菌OD=0.5及共培育時刻為2d時
,轉化功率zui高
,為310個轉化子/108個銀耳芽孢
。轉化子轉接5代後對潮黴素仍有抗性
,說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳
。在試驗室已開始樹立的農杆菌EHA105介導銀耳轉基因辦法的基礎上
。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株
,經過凍融法將帶著有潮黴素磷酸轉移酶(Hph)基因為遺傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因(BAC)為意圖基因的質粒pBHg-BCA導入根癌農杆菌GV3101
,LBA4404和AGL-1中
,並進一步介導轉究
。試驗結L-1具有較高的轉化率
;GV3101轉化率較低
,且假陽性較高
;LBA4404無抗性菌落長出
。此成果表明不同的農杆菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性
,且對受體侵染具有一定的特異性
。本試驗以農杆菌EHA105為參照菌株
,對農杆菌AGL-1介導轉化銀耳進行研究
。基於農杆菌介導轉基因受許多要素的影響
,本試驗從農杆菌與銀耳芽孢共培育時刻
、銀耳芽孢濃度
、農杆菌濃度
、誘導劑乙酰丁香酮(AS)的濃度
、轉率等方麵進行優化
。ELISA試劑盒其轉化條件優化成果為
:AGL-1菌液OD值為0.4~0.5
,AS誘導培育濃度為250μg/mL
、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL
,共培育72h轉化率zui高
,可達500個/10~8
,且陽性菌落為89%
;EHA105菌液OD值為0.4~0.5
。
LIX1IgG 小鼠血管緊張素原(aGT)
Lpin1 IgG 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)
Lpin1 IgG 小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)
L-型電壓依賴型鈣通道αIgG 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)
L-型電壓依賴型鈣通道βIgG 小鼠血管活性腸肽(VIP)
L型鈣通道蛋白a1亞型3體IgG 小鼠溴脫氧核苷(BrdU)
L型鈣通道蛋白a1亞型6IgG 小鼠雄烯二酮(ASD)
L型鈣通道蛋白IgG 小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)
L選擇素IgG 小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)
L-脫羧酶IgG 小鼠心鈉肽(ANP)
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