一
、不抗凝收集血清
:
1
、無添加劑的幹燥空管收集:
血管內壁均勻塗有防止掛壁的藥劑(矽油)
。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固
,等血清自然析出後
,離心使用
。主要用於血清生化(肝功
、腎功
、心肌酶
、等)
、電解質(血清鉀
、鈉
、氯
、鈣
、磷等)
、甲狀腺功能
、藥物檢測
、艾滋病檢測
、腫瘤標誌物
、血清免疫學檢測
。
亦可直接用幹燥EP管收集全血
,充分靜置使得紅細胞充分自然凝固後
,離心分離出血清待用或保存
。
2
、用促凝管收集:
內壁均勻塗有防止掛壁的矽油
,同時添加了促凝劑
。促凝劑能激活纖維蛋白酶
,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體
,進而形成穩定的纖維蛋白凝塊
,如果想快點出結果時
,可采用促凝管
。一般靜置半小時到1小時
,直接離心分離出血清待用或保存,常用於急診生化
。
3
、含有分離膠及促凝劑的收集
:
管壁經過矽化處理
,並塗有促凝劑可加速血液的凝固
,縮短檢驗時間
。管內加有分離膠
,分離膠與PET管具有很好的親和性
,確實起到隔離作用
,一般即使在普通離心機上
,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細胞)*分開並積聚在試管中形成屏障
。離心後血清中不產生油滴
,主要用於血清生化(肝功
、腎功
、心肌酶
、等)
、電解質(血清鉀
、鈉
、氯
、鈣
、磷等)
、甲狀腺功能
、藥物檢測
、艾滋病檢測
、腫瘤標誌物
、血清免疫學
。
用促凝管的優點
:
①
、加速紅細胞的凝固
,無需長時間的靜置
;
②
、帶有分離膠
,有效的將血清分離出來
,更好的避免溶血
;
收集血清的缺點:
①
、需要紅細胞的充分凝固
,所需靜置時間較長
;
②
、分離出的血清相對較少
,1ml全血不抗凝約隻能分離出0.2-0.3ml血清
。
二
、抗凝收集血漿
:
收集抗凝全血
,輕輕顛倒充分抗凝後
,可直接離心分離血漿待用或保存
。根據不同抗凝劑的性能特征
,選擇合適的抗凝劑
。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽
、EDTA及
。
1
、肝素抗凝
:
zui常用的抗凝劑
,一般情況下對相關指標都不會有幹擾
,同時抗凝比例較大(抗凝劑
:
全血=1:30)
,對血液基本沒有稀釋影響
。
肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖
,帶有強大的負電荷
,具有加強抗III滅活絲
氨酸蛋白酶的作用
,從而阻止的形成
,並有阻止血小板聚集等多種抗凝作用
。肝素管一般用於生化及血流變的檢測
,是電解質檢測的選擇
,檢驗血標本中的鈉離子時
,不能使用
,以免影響檢測結果
。也不能用於白細胞計數和分類
,因肝素會引起白細胞聚集
。
盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質濃度無顯著差別
,但肝素鋰還是被認為是的
。這主要是人們認為可使鈉的測定值偏高
,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定)
。
肝素可抑製分子生物學中常用的一些工具酶
,如限製性內切酶
、Taq酶等
,可影響PCR
的實驗結果
。可采用一些方法消除肝素的抑製效應
,如利用肝素酶
,或在分離白細胞後用緩衝液洗滌白細胞兩次以上等
。然而
,許多實驗工作者仍不願意在進行分子生物學實驗時采用肝素作抗凝劑
。
2
、EDTA抗凝
:
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸
,可以有效地鼇合血液中的鈣離子
,鼇合鈣會將鈣從
反應點移走將阻止和終止內源性或外源性凝血過程
,從而防止血液凝固
,與其他抗凝劑比較而言
,其對血球的凝集及血細胞的形態影響較小
,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑
。用於一般血液學檢查
,不能用於血凝
、微量元素及PCR檢查
。
由於EDTA會螯合重金屬離子
,用該抗凝劑的話
,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失
,具體看客戶測定的指標來選擇
,做血常規的話必須用EDTA抗凝
。
3
、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過作用於血樣中鈣離子鼇合而起抗凝作用
,國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)為3.2%或3.8%
,抗凝劑與血比例為1
:9
,主要用於纖溶係統(原時間
、時間
、活化部分時間
、纖維蛋白原)
。采血時應注意采足血量
,以保證檢驗結果的準確性
,采血後應立即輕輕顛倒混勻5-8次
。由於抗凝比例較小(抗凝劑
:全血=1:9)
,對血液有一定的稀釋
,一般不建議
。
選擇抗凝的注意點
:
①
、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致
,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②
、收集抗凝全血後一定要輕輕顛倒
,充分抗凝
,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③
、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿);
④
、抗凝收集的血漿冷凍保存後
,解凍時可能會出現絮狀渾濁
,如有則需要離心去掉渾濁後
用於測定
。
血清
、血漿收集好後
,暫時不測定
,可立即低溫凍存
,溫度越低越好
,中間如*凍融
,-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月
。