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細胞感染有以下三種
點擊次數 :1685 更新時間 :2016-09-12

細胞感染有以下三種 :
(一)細胞準備
將狀態良好的目的細胞接種到24孔板 ,使細胞濃度為 1×105/ml 細胞 ,接種細胞數量因細胞的生長速度而略有不同 , 一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介於 50%至70%之間 。
(二)病毒感染
1.感染細胞MOI 的測定MOI(Multiplicity of Infection ,感染複數)是指每個細胞感染的病毒數 ,通常MOI 越高 ,病毒整合到染色體的數量以及目的蛋白的表達量越高 。對於分裂活躍的細胞 ,比如 Hela 、293 細胞 ,MOI=1~3 時 ,80%以上的細胞均表達目的基因 。而對於非分裂細胞 ,比如原代細胞 ,感染效率較低 。需要進行MOI梯度摸索實驗 ,選擇適合的MOI 進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板(比如12孔板) ;細胞數以第2天密度約50%為宜 ;37℃ 培養過夜 。
對於Polybrene 可施加的細胞 :準備*培養基和 Polybrene混合物 ,Polybrene 終濃度為摸索得到的zui適終濃度 。移去培養基並添加 0.5 ml Polybrene/培養基混合物於每孔中(適用於24 孔板,其他孔板請相應調整體) 。
對於不適用 Polybrene 的細胞 ,以上步驟省略 ,直接進入下麵步驟 :
感染前 ,從冰箱取出並在 37℃水浴中快速融化病毒 ,吸去細胞原有培養基 ,將病毒原液加入細胞中 ,輕輕8字混勻 。感染後第二天(約12小時) ,吸去含病毒的培養液 ,換上新鮮的*培養液 ,繼續37℃培養 。感染後48小時 ,對於帶 GFP報告基因的病毒 ,可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率 ,對於攜帶 Puromycin抗性基因的病毒 ,換上含適當濃度的 Puromycin 的新鮮*培養液 ,篩選穩定轉導的細胞株 。

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