本用於測定大鼠血清 、血漿及相關液體樣本中肺炎病毒（PVM）表達 。

實驗原理

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肺炎病毒（PVM）表達 。用純化的大鼠肺炎病

毒（PVM）抗體包被微孔板 ，製成固相抗體 ，可與樣品中肺炎病毒（PVM）相結合 ，經洗

滌除去未結合的抗體和其他成分後再與 HRP 標記的肺炎病毒（PVM）抗體結合 ，形成抗體

抗原 酶標抗體複合物 ，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色 。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化

成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，

與 CUTOFF 值相比較 ，從而判定標本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在與否 。

組成

 

  1  30 倍濃縮洗滌液

  2  酶標試劑

  3  酶標包被板

  4  樣品稀釋液

  5  顯色劑 A 液

  6  顯色劑 B 液

  標本要求

  20ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  12 孔×8 條

  6ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  6ml×1/瓶

  7  終止液

  8  陽性對照

  9  陰性對照

  10  說明書

  11  封板膜

  12  密封袋

  6ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  1 份

  2 張

  1 個

 

  1．標本采集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能

馬上進行試驗 ，可將標本放於20℃保存 ，但應避免反複凍融

  2．不能檢測含 NaN3 的樣品 ，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。

操作步驟

  1. 編號 ：將樣品對應微孔按序編號 ，每板應設陰性對照 2 孔 、陽性對照 2 孔 、空白對照 1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同）

   2. 加樣 ：分別在陰 、陽性對照孔中加入陰性對照 、陽性對照 50!l 。然後在待測樣品孔先

加樣品稀釋液 40!l ，然後再加待測樣品 10!l 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不

觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 ，

  3. 溫育 ：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾 。

  4. 配液 ：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

  5. 洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置 30 秒後棄去 ，如此

重複 5 次 ，拍幹 。

  6. 加酶 ：每孔加入酶標試劑 50!l ，空白孔除外 。

  7. 溫育 ：操作同 3 。

  8. 洗滌 ：操作同 5 。

  9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑 A50!l ，再加入顯色劑 B50!l ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色

  10 分鍾.

  10. 終止 ：每孔加終止液 50!l ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

  11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止

液後 15 分鍾以內進行 。

操作程

 

計算和結果判定 ：

試驗有效性 ：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10 

臨界值（CUT OFF）計算 ：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 

陰性判定 ：樣品 OD 值<  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陰性

陽性判定 ：樣品 OD 值≥  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陽性

 。

注意事項

  1．操作嚴格按照說明書進行 ，本試劑不同批號組分不得混用 。

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