zui近看大家常提到支原體汙染
，就翻了翻書
，做了些筆記
，現在貼出來和大家分享：
支原體是一種大小介於細菌和病毒之間(zui小直徑0．2um)並獨立生活的微生物．約有1%可通過濾菌器
。支原體無壁形態呈高度多形性．可為圓形
、絲狀或梨形
。
支原體形態多變
，在光境下不易看清內部結構
。電鏡下觀察支原體膜為三層結構．其有電幹密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束
。支原體多吸附或散在於細胞表麵和細胞之間
。橫斷麵與細胞微絨毛相似
，但微絨毛電子密度比支原體小
，且無顆粒群
或束
。
支原體代謝需固醇類物質
、部分種類需要
、O 2或葡萄糖
，每一種支原體都有自身持點
。多數 支原體適合於偏堿條件下生存(PH7．6—8．0)
，對酸耐受性差
。對熱比較敏感
，對一般抗生素不敏感
。
支原體汙染細胞後．培養液可不發生混濁．多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著
，細微變化也可由於傳代
、換液而緩解．因此易被忽視
。但個別嚴重者
，可致細胞增殖緩慢．甚至從培養器皿脫落
。
為確定有無支原體汙染可做如下檢酗
：
①相差顯微境檢測
：將細胞按種於事先放置於培養瓶內的蓋玻片上
，24h後取出
，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位於細胞表麵和細胞之間
。
②熒光染色法
：熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258
，可使支原體內含有的DNA 著色
，染色後用熒光顯微鏡觀察
。具體方法如下
：首先將細胞接種蓋玻片上
，在細胞未長滿前取出玻片
，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下
，用l
： 3醋酸甲酵固定10Min
，然後用生理鹽水漂洗．置於用生理鹽水配濃度為50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min
。染色後用蒸溜水洗1—2min．向細胞麵滴加pH5．5磷酸緩衝液數滴
，然後置熒光顯微鏡下觀察
。鏡下支原體為散在於細胞同圍或附於細胞膜 表麵的亮綠色小點
。
③電鏡檢查
；用掃描電鏡方法簡便快速．也可以利用透射電鏡
。
④DNA分子條文檢查或支原體培養等方法
：檢出率高．但方法較為複雜
支原體是一類缺乏壁的原核細胞型微生物
，大小一般在0.3-0.5um之間
，呈高度多形性
，有球形
、杆形
、絲狀
、分枝狀等多種形態
。它不同於細胞
，也不同於病毒
。支原體用普通染色法不易著色
，用姬姆薩染色很淺
，革蘭染色為陰性
。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長
，營養要求比細菌高
。
細胞培養（特別是傳代細胞）被支原體汙染是個世界性問題
。在細胞培養中支原體感染發生率達到63%
，支原體感染發生後能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達
，又不能通過可視法對其進行檢測
，而且 它對細胞的生長率影響較小
，不易引起注意
。國內外研究表明
，95％以上是以下四種支原體
：口腔支原體（M.orale）
、支原體（M.arginini）
、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii）
，為牛源性
。以上是zui常見的汙染細胞培養的支原體菌群
，但能夠汙染細胞的支原體種類是很多的
，國外調查證明
，大約有二十多種支原體能汙染細胞
，有的細胞株可以同時汙染兩種以上的支原體
。
支原體汙染的來源包括工作環境的汙染
、操作者本身的汙染（一些支原體在人體是正常菌群）
、培養基的汙染
、汙染支原體的細胞造成的交叉汙染
、實驗器材帶來的汙染和用來製備細胞的原始組織或器官的汙染
。
組織細胞培養工作中
，主要從以下幾個方麵來預防支原體的汙染
：控製環境汙染
；嚴格實驗操作
；細胞培養基和器材要保證無菌
；在細胞培養基中加入適量的抗生素
。支原體汙染細胞後
，特別是重要的細胞株
，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理
、抗血清處理
、抗生素加抗血清和補體聯合處理
。支原體zui突出的結構特征是沒有壁，一般來講
，對作用於細胞壁生物合成的抗生素
，如 -內酰胺類
、等*不敏感
；對多粘菌素（polymycin）
、
、磺胺藥物普遍耐藥
。對支原體zui有抑製活性及常用於支原體感染治療的抗生素是四環素類、大環內酯類及一些
；其他類抗生素如氨基糖苷類
、對支原體有較小抑製作用
，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑
。InvivoGen公司研究開發的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體
，不影響細胞本身的代謝
，並且用M-Plasmocin處理過的培養細胞
，不會重新感染支原體
。