在植物病理學研究工作中經常要使用各種不同的
。培養基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養
，用人工方法配製而成的營養基質
。其中含有碳源
、氮源
、無機鹽
、維生素以及水分等
。微生物在培養基上生長繁殖還必須在zui適pH範圍內才能生長得更好
，因此
，對不同種類的微生物應將培養基調節到一定的pH範圍。
的種類很多
，不同的微生物所需要的培養基不同
。依物理性狀可分為液體的
、固體的和半固體的三種
。固體培養基是在液體培養基中加入1．5％--2％的瓊脂
，半固體培養基是加入0．2％～0．5％的瓊脂
。瓊脂又稱瓊膠或洋菜
，是由海藻加工而成
，其化學性質穩定一般微生物均不能分解利用
。它在95℃熱水中溶化成溶膠
，冷卻到45℃以下時又重新凝固
，故一般實驗中常用它作為凝固劑
。
根據營養物質來源的不同
，培養基可分為天然
、半合成和合成培養基三類
。天然培養基是以自然界原有的有機物為材料經滅菌後製成
，如馬鈐薯
、胡 蘿卜水果
、大麥粒
、高粱粒等
。半合成培養基中既有一些天然的有機物質
，又有一些成分簡單或明確的化合物
。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養基(PDA)
、肉汁腖培養基(NA)等。合成培養基是由一些成分明確的化合物配製而成的
，無任何成分不明確的物質
，常用於研究微生物的生理生化性狀
，如查氏(Czapek)培養基等
。
根據培養基用途不同
，可分為生長繁殖培養基
、富集培養基
、貯存培養基
、選擇性培養基和鑒別培養基等
。在植物病理學研究中
，zui常用培養基有馬鈴薯葡萄糖培養基
，主要用於分離培養病原真菌
。
在培養基配製完之後
，必須經過滅菌
，以便*殺死其中原有的一切微生物
。
三
、材料
、試劑與儀器
1．材料馬鈴薯
。
2．試劑 葡萄糖
、瓊脂等
。
3．儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋
、pH試紙(或酸度計)
、試管
、鋁鍋
、攪拌棒
、三角瓶
、燒杯
、漏鬥
、量筒
、紗布
、棉花
、天平等
。
四
、操作步驟
PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖培養基)配方
：去皮馬鈴薯200g 葡萄糖20g瓊脂15—20g蒸餾水1000ml 自然pH
。在PDA培養基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖
，這樣配製的培養基也稱為PSA培養基
。
(1)稱量
。稱量去皮馬鈴薯200g
，葡萄糖20g
，瓊脂15--20g
。提示
：瓊脂加入的量取決於瓊脂的質量
，質量好的15g就夠了
，質量差的
應適當增加
。另外
，在夏天氣溫較高時
，適當增加用量
。
(2)將馬鈴薯切成小塊
，放入鍋中
，加水1000ml
，煮沸30min
。用紗布濾去馬鈴薯殘渣
。
3)將馬鈴薯濾液放回鍋中
，加入瓊脂
，加熱熔化
。
提示
：在瓊脂熔化的過程中
，需要用玻璃棒不斷攪拌
，並控製火力不要使培養基溢出或燒焦
。
(4)加入葡萄糖
。葡萄糖溶解後
，加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分
，定容至1000ml
。
提示
：通常在製作培養基的鍋內用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度
，如1000ml
、2000ml等
，在定容時直接將水加至已標記的刻度即可
。
(5)分裝
。根據不同的實驗目的
，可將配製的分裝於試管內或三角瓶內
。分裝試管
，其量為管高的1／5
，滅菌後製成斜麵
。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜
。
(6)加塞
。在管口或瓶口塞上棉塞
。棉塞要用未脫脂的經彈鬆的棉花
，棉塞可過濾空氣
，防止雜菌侵入並可減緩培養基水分的蒸發
，故在植物病理學研究工作中普遍使用
。
正確的棉塞是形狀
、大小
、鬆緊與管口或瓶口*適合
，過緊時妨礙空氣流通
，操作不便
；過鬆則達不到濾菌的目的
，且棉塞過小往往容易掉進試管內
。正確的棉塞頭較大
，約有1／3在外
，2／3在試管內
。分裝過程中注意不要使培養基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞
，引起汙染
。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特製的金屬
、塑料試管帽
，為讓空氣可以自由進出
，橡皮塞不要過緊
，滅菌前應夾一紗線在管口
。
(7)包紮
。加塞後
，將試管用線繩捆好
，再在棉塞外包一層牛皮紙
，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞
，其外再用一道線繩紮好
。用記號筆注明培養基名稱
、配製日期
、組別
、製作人等
。
(8)滅菌
。將上述培養基以0．103MPa，121C
，高壓蒸氣滅菌20min
。
(9)擱置斜麵
。將滅菌的試管培養基冷至5013左右(以防斜麵上冷凝水太多)
，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上
，擱置的斜麵長度以不超過試管總長的一半為宜
。
培養基經滅菌後
，必須放在37C溫箱培養24h
，無菌生長者方可使用
。PDA培養基一般不需要調pH
。對於要調節pH的培養基，一般用pH試
紙測定其pH
。如果培養基偏酸或偏堿時
，可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液進行調節
。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液
，防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。
提示
：pH不要調過頭
，以避免回調而影響內各離子的濃度
。配製低pH的瓊脂培養基時
，若預先調好pH並在高壓蒸汽下滅菌
，則瓊脂因水解不能凝固
。因此
，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌後再混合
，或在中性pH條件下滅菌
，再調整pH
。