培養基pH值變化迅速

1.培養箱CO2分壓設置錯誤  根據培養基中NaHCO3的濃度增大或降低培養箱CO2的分壓 ，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時 ，應相應地使用5%-10%的CO2分壓

2.細胞培養瓶瓶蓋過緊  將瓶蓋旋鬆1/4圈

3.碳酸氫鹽緩存係統緩衝能力不足   加入HEPES緩衝液 ，使其終濃度為10-25mM

4.培養基中鹽含量不正確  CO2平衡環境中使用以Earle平衡鹽為基礎的培養基 ，大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎的培養基

5.細菌 、酵母或真菌汙染   將細胞和培養基滅菌處理後丟棄

 

細胞無法在培養器皿上貼壁生長

 

1.細胞消化過度  縮短消化時間或減少用量

2.支原體汙染  隔離細胞 ，檢測是否感染支原體 ；清洗通風廚和培養箱 ，如細胞被汙染 ，滅菌處理後丟棄

3.培養基中無附著因子  如果使用的是無血清配方 ，應確保含有附著因子或者使用經過包被的培養板

 

懸浮細胞聚集成團

 

1.存在鈣離子和鎂離子  用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞 ，輕輕吹打細胞 ，使其形成單細胞懸液

2.支原體汙染  隔離細胞 ，檢測是否感染支原體 ；清洗通風廚和培養箱 ，如細胞被汙染 ，滅菌處理後丟棄

3.蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解 、DNA釋放  用0.001%DNA酶I處理細胞 ；用PBS衝洗後再接種到新培養基中

 

細胞生長緩慢

 

1.培養基或血清改變  比較不同培養基配方中葡萄糖 、氨基酸及其他成分有無差異 ；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異 ；增大細胞初始接種密度 ；使細胞逐步適應新的培養基

2.必需生長促進成分（如L-或生長因子）耗竭 、缺乏或分解  去除原培養基 ，加入新鮮培養基 ；向培養基中添加生長促進成分（如L-）

3.輕度細菌或真菌汙染  在不添加抗生素的條件下進行培養 ，如細胞被汙染 ，滅菌處理後丟棄

4.時間存儲不當  血清應於-5℃至-20℃下儲存 ；培養基應於2℃~8℃下避光儲存 ；盡量減少血清和培養基見光時間

5.細胞初始接種密度低  增大活細胞接種密度

6.細胞衰老 、老化  將老化細胞丟棄 ，取用代數較少的細胞

7.支原體汙染  隔離細胞 ，檢測是否感染支原體 ；清洗通風廚和培養箱 ，如細胞被汙染 ，滅菌處理後丟棄

 

細胞死亡

 

1.培養箱中無CO2  監測培養箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶 ；經常檢測管路連接處是否漏氣 ；不要頻繁開啟培養箱門

2.培養箱內溫度有波動  監測培養箱內溫度 ，及時校正

3.使用抗生素達到毒性濃度  減少抗生素的用量 ；使用無血清培養基時 ，抗生素濃度應降低至1/10

4.細胞複蘇或凍存時受到損傷  取用新的細胞

5.培養基的滲透壓不合適  檢查*培養基的滲透壓 。大多數哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓 ，加入某些試劑和藥物後會影響培養基的滲透壓 ；昆蟲細胞培養基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高於哺乳動物細胞

6.培養基中毒性代謝產物蓄積  去除原培養基 ，換用新鮮培養基

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