細胞處理 :
1 、複蘇細胞 :將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍 ,加入4mL培養基混合均勻 。在1000RPM條件下離4分鍾 ,棄去上清液 ,補加1-2mL培養基後吹勻 。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中 ,加入約8ml培養基 ,培養過夜) 。第二天換液並檢查細胞密度 。
2 、細胞傳代 :如果細胞密度達80%-90% ,即可進行傳代培養 。
對於貼壁細胞 ,傳代可參考以下方法 :
1)棄去培養上清 ,用不含鈣 、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次 。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於培養瓶中 ,置於37℃培養箱中消化1-2分鍾 ,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況 ,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台 ,輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化 。
3)按6-8ml/瓶補加培養基 ,輕輕打勻後吸出 ,在1000RPM條件下離4分鍾 ,棄去上清液 ,補加1-2mL培養液後吹勻 。
4)將細胞懸液按1 :2到1 :5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中 。
接下來
,細胞在新的培養環境中繼續生長
,需要密切關注其狀態
。每天定時觀察細胞形態
、密度以及培養基的顏色變化
,確保無細菌或黴菌汙染
。若培養基因細胞代謝而變黃
,應及時更換新鮮培養基
,以維持良好的生長環境
。
在細胞培養過程中
,溫度
、濕度及CO₂濃度的控製至關重要
。通常
,哺乳動物細胞培養在37℃
、5% CO₂及飽和濕度的條件下進行
,這樣的條件能夠模擬體內環境
,促進細胞增殖
。定期檢查培養箱的性能參數
,確保它們處於最佳狀態
,是細胞培養成功的關鍵
。
此外
,細胞的健康狀態還需通過細胞活力檢測來評估
。常用的方法包括台盼藍染色法
,通過染色區分活細胞與死細胞
,從而計算出細胞活力百分比
。保持高細胞活力對於後續實驗
,如細胞轉染
、細胞分化研究或藥物篩選等
,都是至關重要的
。
當細胞生長至適宜密度時
,根據實驗需求
,可進行凍存保藏或進一步實驗處理
。細胞凍存時
,需先配置含有適當比例血清和DMSO的凍存液
,將細胞懸液與凍存液混合後
,置於程序降溫盒中
,逐步降溫至-80℃超低溫冰箱
,最終轉移至液氮罐中長期保存
。這一過程確保了細胞的長期存活和實驗的可重複性
。
綜上所述
,細胞處理是一個精細且需要耐心的工作
,從複蘇到傳代再到後續的維護
,每一步都需嚴格遵循操作規程
,以確保細胞的健康生長和實驗的成功進行
。