使用方法 :
測定法的靈敏度來自作為報告的酶 。酶是一種有機催化劑 ,很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ,產生可供觀察的顯色反應現象 。因此該體係常被稱為酶放大體係 。
1. 標準品的稀釋 :本試劑盒提供原倍標準品一支 ,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣 :分別設空白孔 、標準孔 、待測樣品孔 。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl ,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ,然後再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍) 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ,盡量不觸及孔壁 ,輕輕晃動混勻 。
3. 溫育 :用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液 :將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌 :小心揭掉封板膜 ,棄去液體 ,甩幹 ,每孔加滿洗滌液 ,靜置30秒後棄去 ,如此重複5次 ,拍幹 。
6. 加酶 :每孔加入酶標試劑50μl ,空白孔除外 。
7. 溫育 :操作同3 。
8. 洗滌 :操作同5 。
9. 顯色 :每孔先加入顯色劑A50μl ,再加入顯色劑B50μl ,輕輕震蕩混勻 ,37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止 :每孔加終止液50μl ,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。
11. 測定 :以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行 。
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