操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣 ：在酶標包被板上設標準品孔10孔 ，在di一 、第二孔中分別加標準品100μl ，然後在di一 、第二孔中加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後從di一孔 、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔 ，再在第三 、第四孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉 ，再各取50μl分別取50μl分別加到第七 、第八孔中 ，再在第七 、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第七 、第八孔中加到第五 、第六孔中 ，再在第五 、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ，混勻 ；混勻後從第五 、第六孔中各分別取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉 。（稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L ，30 ng/ ，15 ng/L） 。
2. 加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液 ：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用 。
5. 洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。
6. 加酶 ：每孔加入酶標試劑50μl ，空白孔除外 。
7. 溫育 ：操作同3 。
8. 洗滌 ：操作同5 。
9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl ，再加入顯色劑B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止 ：每孔加終止液50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。 測定應在加終止液後15分鍾 。