产品列表PROUCTS LIST
新闻动态NEWS
人雌激素受体基因PCR检测试剂盒反应五要素
点击次数：572 更新时间：2024-01-23
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物 、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物 ：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上 ，只要知道任何一段模板DNA序列 ， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物 ，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右 。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜 ，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构 ，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带 。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对 ，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点 ， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处 。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量 ：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol ，以*引物量产生所需要的结果为好 ，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
上一篇 IRF1 ELISA定量试剂盒 ：深入了解IRF1生物标志物的应用 下一篇 猪捷申病毒PCR检测试剂盒实验规则