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      兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)elisa试剂​操作步骤
      点击次数 :634 更新时间:2023-03-15

      操作步骤 :

      1. 标准品的稀释与加样 :在酶标包被板上设标准品孔10孔 ,在di一、第二孔中分别加标准品100μl ,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀 ;然后从di一孔 、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三 、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉 ,再各取50μl分别取50μl分别加到第七 、第八孔中 ,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五 、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中 ,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/ ,15 ng/L)。

      2. 加样 :分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁 ,轻轻晃动混匀。

      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟 。

      4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

      5. 洗涤:小心揭掉封板膜 ,弃去液体 ,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去 ,如此重复5次 ,拍干。

      6. 加酶 :每孔加入酶标试剂50μl ,空白孔除外。

      7. 温育:操作同3 。

      8. 洗涤:操作同5。

      9. 显色 :每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀 ,37℃避光显色15分钟.

      10. 终止 :每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 。 测定应在加终止液后15分钟。

       柚皮素英文名称 :Naringenin :480-41-1分子式:272.25278

       羽扇豆醇英文名称:Lupeol:545-47-1分子式:426.7174

       鸢尾苷元磺酸钠英文名称:Tectorigenin sodium sulfonate:548-77-6分子式:300.26

      原花青素英文名称 :Primary anthocyanin :4852-22-6分子式:594.52

       α-香附酮英文名称 :A-cyperone :473-08-5分子式:218.33458

       槲皮苷英文名称 :Quercitrin :522-12-3分子式:448.3769

       西贝碱英文名称:Sipeimine:61825-98-7分子式:429.64

       西红花苷Ⅱ英文名称:Crocin II:55750-84-0分子式:814.82

       西红花苷I英文名称:Crocin I :94238-00-3分子式:976.96456

       仙茅苷英文名称:Cents a :85643-19-2分子式:466.44

       相思豆碱 英文名称:Acacia base :21339-55-9分子式:218.25

       香蒲新苷英文名称 :Typhaneoside:104472-68-6分子式:770.68528


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