操作步驟:
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支 ，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。
2400pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1200pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
600pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
300pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
150pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同） 、標準孔 、待測樣品孔 。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl ，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ，然後再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液 ：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。
6. 加酶 ：每孔加入酶標試劑50μl ，空白孔除外 。
7. 溫育 ：操作同3 。
8. 洗滌 ：操作同5 。
9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl ，再加入顯色劑B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止 ：每孔加終止液50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。測定應在加終止液後15分鍾以內進行 。
計算
以標準物的濃度為橫坐標 ，OD值為縱坐標 ，在坐標紙上繪出標準曲線 ，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度 ；再乘以稀釋倍數 ；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式 ，計算出樣品濃度 ，再乘以稀釋倍數 ，即為樣品的實際濃度 。
無水磷酸三鈉/三堿式磷酸鈉/原磷酸三鈉/磷酸三鈉/磷酸鈉/Trisodium phosphateAR ，98% ，500克國產/進口
2,2-聯喹啉-4,4-二羧酸鈉/4,4-二羧基-2,2-聯喹啉二鈉/2,2-聯喹啉-4,4-二甲酸二鈉/BCABR ，98%5克國產/進口
D(-)酒石酸鈉/酒石酸鈉/D-酒石酸鈉/2,3-二羥基丁二酸鈉/D-(+)-Tartaric acid disodium saltAR ，99%500克國產/進口
L(-)酒石酸鈉/酒石酸鈉/L-酒石酸鈉/L-(+)-Tartaric acid disodium saltAR ，99%500克國產/進口
偏釩酸鈉/二水偏釩酸鈉/釩酸鈉/Sodium metavanadate dihydrateAR ，99.9% ，25克國產
無水偏釩酸鈉/釩酸鈉/Sodium metavanadateAR ，99% ，25克國產/進口
四苯硼鈉/四苯基硼酸鈉/四苯硼酸鈉/NaTBPAR ；99% ，10克國產/進口
氟化鈉/Sodium fluorideGR ，99% ，500克國產
氫氧化鈉/苛性鈉/燒堿/鈉氧條/苛性曹達/固堿/火堿/Sodium hydroxideGR ，97% ，500克國產
氟硼酸鈉/四氟硼鈉/四氟硼酸鈉/Sodium fluoroborateCP ，98% ，500克國產
六偏磷酸鈉/偏磷酸六鈉/格來漢氏鹽/卡甘/磷酸鈉玻璃/格臘哈姆鹽/六偏/六聚偏磷酸鈉/Sodium hexametaphoshpateCP ，95%500克國產/進口
萘酚AS-MX磷酸鹽/色酚AS-MX磷酸鹽/磷酸萘酚AS-MX/Naphthol AS-MX phosphate高純 ，99%500毫克國產/進口
萘酚AS-BI磷酸二鈉/萘酚磷酸鈉/7-溴-N-(2-甲氧基苯基)-3-(磷酸氧基)萘-2-甲酰胺二鈉鹽/Naphthol AS-BI phosphate disodium saltBR ，99.5%100毫克國產/進口
單硬脂酸甘油酯/硬脂酸甘油酯/單甘酯/甘油單硬酯酸酯/十八酸甘油酯/GMSCP100克國產/進口
丁二酸二甲酯/琥珀酸二甲酯/琥珀酸甲酯/Dimethyl succinateCP ，98%100毫升國產/進口
乙酰乙酸甲酯/乙酰醋酸甲酯/丁酮酸甲酯/β-丁酮酸甲酯/3-丁酮酸甲酯/MAACP ，98%500毫升國產/進口
對羥基苯甲酸甲酯/尼泊金甲酯/4-羥基苯甲酸甲酯/對羥基安息香酸甲酯/泊金M/尼泊金/Methyl 4-hydroxybenzoateCP ，98.5%100克國產/進口