ELISA法具有靈敏度高 、特異性強 、重複性好的特點，並具有操作簡便 、無放射性危害的優點 ，因而多年來廣泛應用於血站和醫院的實驗室中 ，但在測定中常會出現一些誤差和問題 。老哥俱樂部通過幾年的實驗觀察 ，認為影響結果的因素有如下方麵。

　　1 Elisa試劑盒

　　（1）抗原 、抗體活性對效價的影響 ：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價降低或失活 ，結果不易判斷 。再有ELISA法靈敏度高 ，對雜質的反應靈敏度也高 ，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性 。

　　（2）酶結合物濃度過高 ，也會導致OD值假性增高 。

　　2 試驗儀器

　　（1）加樣器是否經過校正 ，酶免測定血清用血量很少 ，如手工加樣器的性能不好 ，吸取樣品不精確 ，會使結果忽高忽低 。

　　（2）每次洗板前 ，應檢查洗板機針孔有無堵塞 。

　　3 操作

　　（1）檢測前先將Elisa試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min後使用 ，試劑用完及時放回冰箱冷藏 ，以免造成試驗結果假性降低 。

　　（2）加樣時注意勿觸及包被板底部 ，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實驗結果的準確性 。

　　（3）洗滌不充分 ，會使結果假性增高 ，過分洗滌呈假陰性 。

　　（4）比色時應保持包被孔底部無異物 、無水汽 ，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時 ，底部留有水汽 ，應將板底擦幹後進行比色 ，水汽或孔內氣泡也會使OD值升高 。

　　（5）抗原與抗體反應達到*平衡 ，依賴於溫度與時間 。溫度高於45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低於4℃ ，影響反應速度 。總之 ，由於ELISA實驗的影響因素較多 ，在實際工作中必須操作規範 、仔細 ，避免和排除各種因素的影響 ，使之得到準確可靠的檢驗結果 。